中国兰的组培快繁技术
中国兰又称东洋兰, 是兰科兰属中的地生兰, 为庞大兰科家族中独特希少的种属。它芳花清丽, 高雅幽香, 是我国的传统名花,具有很高的观赏价值和经济价值, 其中不乏珍品, 千金难求。但传统的分株繁殖, 繁殖系数极低, 带毒株数多, 种性退化。种子中缺少胚乳和子叶, 胚发育不完全, 致使常规播种难以萌生。利用组织培养技术, 展开快速繁殖是开发和发展中国兰花产业的有效途径。
1 .中国兰茎尖、侧芽组培技术
(1 )采样、消毒与接种
为了尽可能减少供样兰花所带病菌, 应采取不施有机肥, 放置在透光避雨处, 当新芽初露时即让幼芽袒露土面等特殊管理措施。切取6～13 厘米的新芽( 因品种而异取样有差别) , 用锋利刀片除去根、脏物和外包叶2～3 片, 充分洗净。
在材料上切取2～3 厘米茎顶, 在10%次氯酸钠药液中消毒10 分钟, 若带菌严重, 利用0 .1%升汞和饱和漂白粉上清液交叉消毒。灭菌后用无菌水冲洗数次, 再放到灭菌滤纸上吸干水份, 然后在解剖镜下, 无菌操作剥取茎尖和腋芽。如以去病毒为目的, 所剥取的茎尖应在0 .2 毫米以下, 否则可剥取2 毫米以上茎尖, 带2 个叶原基, 以有益于成活。
(2 )原球茎的引诱
茎尖的启动率和成功率均高于侧芽。新芽长度的选择不管茎尖或侧芽均以选取9～ 13 厘米长的新芽为佳。新芽引诱的成功率最高。培养基的选择因品种而异, 春兰类品种以White+ 1 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 5毫克/ 升萘乙酸+ 8 .5% 椰乳; 或B1 1+ 1 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 2 毫克/ 升萘乙酸的培养基最优。“夏惠”、“ 秋素”等品种则以MS+ 0 .5 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 1 毫克/ 升萘乙酸+ 0 .5%活性炭培养基最好。兰花外植体接种后放置在23～25 ℃的黑暗条件下培养, 1～2 个月后可分化1 至数个乳白色的原球茎, 在解剖镜下视察类似桑果形状的原球崛起,以后转绿, 再经培养而呈根状茎( 或呈树枝状的丛生形)。中国兰经茎尖培养, 在原球茎引诱启动后易褐变死亡, 死亡率有时高达3/ 4。因此, 应通过采取较大外植体接种, 下降培养温度, 采取暗培养, 减少伤口面, 在培养基中添加褐变抑制剂( 如聚乙烯吡咯烷酮、硫代硫酸钠、芸香赣、柠檬酸等) 或配合利用活性炭等综合措施, 以减轻褐变的不利影响。
(3 )原球茎的增殖
茎尖、侧芽接种3～6 个月后, 根状茎构成时便可分割继代, 增殖培养基以White 或B11为基本培养基, 附加1～2 毫克/ 升萘乙酸的液体培养基为好。放置在慢速转床上加光培养( 1～2 转/ 分钟) , 每隔15 天更换1次培养基, 连续继代3～4 次后, 再转入相同成份、附加有活性炭(0 .3%)和柠檬酸( 500 毫克/ 升) 的固体培养基, 每个月继代1次。液培、固培交替进行。增殖培养中, 原球茎的分割不可太小, 培养群体不宜太少, 培养液不可过量, 继代培养时间不可太长。否则,原球茎生长不良, 乃至死亡。
(4 )成苗和壮苗培养
将原球茎转入B5+ 2～3 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .2 毫克/ 升萘乙酸的琼脂培养基上,放置在25 ℃左右, 光强1 000 勒条件下, 不久便可分化芽和根, 从而构成完全的小植株。
当苗长至2 ～ 3 厘米时, 应及时转入B5+ 2毫克/ 升萘乙酸+ 0 .3%活性炭的培养基中, 让根芽能成比例地正常生长。壮苗培养以大试管(30 毫米×200 毫米) 为好, 放置在28℃左右, 光强2 000 勒, 每天光照12 小时的环境中。当苗高12 厘米以上, 根苗茁壮时便可移栽。
2 .兰花无菌播种技术
因兰科植物种子皆缺少发芽所需要的储藏营养, 人工播种需要在无菌条件下配适合宜的培养基才能萌生。中国兰因种皮阻碍水份及气体通过, 并含有阻碍发芽的物资, 或因胚活力衰弱等缘由, 以致无菌播种时萌生或发芽率极低,其中地生兰发芽率最低。因此, 要采取无菌播种技术。
(1 )种子消毒和预处理
取8～9 成熟、还没有爆裂的地
生兰蒴果, 先用酒精棉擦去果面脏物, 用消毒刀片将蒴果剖开, 取出种子,用细白布包裹好。浸入无菌水使之吸胀, 再用无菌滤纸吸干过剩水份, 用0 .1 摩尔/ 升氢氧化钾溶液预处理5～10 分钟(氢氧化钾溶液能软化种皮, 去除抑制发芽之化学物资, 显著提高地生兰的萌生率) , 无菌水冲洗3 次( 操作中用玻棒挤压细白布包, 使漂洗充分) , 无菌滤纸吸干水份后, 再放入饱和漂白粉上层清液中消毒10～20分钟, 最后用无菌水冲洗数次, 便可播种。种子表面消毒以升汞、次氯酸钠和漂白粉效果较好, 双氧水较差, 升汞对构成原球茎后的生长有不良影响, 次氯酸钠、漂白粉则有增进种子萌生和原球茎生长的明显作用。
(2 ) 播种用培养基
通常采取的培养基有Knudson、Vacin &Went、White、B11等。地生兰种子以B11或White+ 1 毫克/升6 苄基腺嘌呤+ 1 毫克/ 升萘乙酸+ 0 .3% 活性炭的培养基为最优。杂交种子则以B11+ 1 毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 1 毫克/ 升萘乙酸的培养基为佳。附加萘乙酸能提高兰花种子的萌生率, 但萌生后死亡数增加, 如与6 苄基腺嘌呤配合使用,效果较好。附加活性炭也能大大减少已萌生种子的死亡率, 特别能提高地生兰种子的萌生率。但活性炭对地生兰×气生兰的杂交种子萌生却表现出明显的抑制作用。
(3 )原球茎培养
兰花种子无菌培养后经暗培养, 萌生构成白色原球茎, 再发育成绿色原球茎(气生兰呈圆球形, 地生兰呈根状)。放在25 ℃左右的有弱光的地方培养, 原球茎若转入White+ 2 毫克/ 升萘乙酸+ 5%椰乳+ 0 .2%活性炭的培养基中, 可大量增殖。
(4 )成苗与壮苗培养
根芽分化以B5+ 2 .5毫克/ 升6 苄基腺嘌呤+ 0 .2 毫克/ 升萘乙酸的培养基效果好。壮苗培养基以B5 最优。
(5 )试管苗的移栽和养护
兰花试管苗“ 自立”能力差, 移栽难度大。其移栽养护成功的关键技术是: 打开试管塞, 炼苗3～4天苗取出后洗净黏在根上的培养基, 并尽可能少伤根。晾苗后栽植在通气、透水、保湿的介质中。先在高温弱光条件下缓苗6 ～10天, 然后在15～25 ℃ , 空气相对湿度80%左右的条件下养护, 并注意定期补施营养液。
相关文章
